执行开动前，抗东说念主软骨糖卵白 39 抗体早已在微孔酶标板上设下 “陷坑”。当加入 HCgp-39 校准品和待测样本时，HCgp-39 就像 “小方针”，自动与抗体集聚。接着开yun体育网，HRP 象征的抗东说念主软骨糖卵白 39 抗体也加入其中，变成相识的 “夹心复合物”。经过温育和洗涤，去除未集聚的要素后，加入底物 A 和 B，在 HRP 的催化下，底物从无色变为蓝色，再加入断绝液（2M 硫酸），一忽儿变成黄色。黄色越深，标明样本中的 HCgp-39 越多。临了，通过酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），就能盘算出样本中 HCgp-39 的浓度。

执行前，要提前 2 小时将试剂盒和样本从雪柜取出，使其在室温下充分复温。从雪柜取出的浓缩洗涤液若有结晶，放在温水浴中加热使其熔解，再按 1:20 的比例用蒸馏水稀释。底物液 A 和 B 需在使用前按 1:1 的体积夹杂，且在 15 分钟内使用。

执行还需要酶标仪（450nm）、精密移液器及一次性吸头、蒸馏水、洗瓶或自动洗板机、37℃水浴锅或恒温箱、500ml 量筒等物品。

样本集聚后，细胞培养上清、血清、血浆齐要在 4000rpm 要求下离心 20 分钟，上清液保存在 - 20℃以下，幸免反复冻融。组织匀浆需用预冷 PBS 冲洗组织、剪碎后按 1:9 比例与 PBS 夹杂研磨，可超声破灭或反复冻融，5000×g 离心 5-10 分钟取上清。细胞索取液的得到，贴壁细胞经 PBS 清洗、胰卵白酶消化后离心收罗，悬浮细胞成功离心收罗，细胞用 PBS 洗涤 3 次，重悬后反复冻融，1500×g 离心 10 分钟取上清。其他生物体液则在 1000×g 离心 20 分钟后取上清检测。

操作时，先配制好责任液，从铝箔袋中取出所需板条，剩余的密封放回雪柜。建筑好步调品孔、0 值孔、空缺孔和样本孔，加入相应液体后，加入 HRP 象征的检测抗体，用封板膜盖住响应板，在 37℃避光孵育 60 分钟。之后进行洗板，若用自动洗板机，牢记添加 30 秒浸泡才能。将底物夹杂后加入各孔，再次避光孵育 15 分钟，临了加入断绝液，在酶标仪 450nm 波长上读取 OD 值。

以步调品浓度为横坐标，对应的吸光度为纵坐标，用盘算机软件拟合创建步调弧线方程，通过样本吸光度盘算浓度值，若样本稀释过，需乘以稀释倍数。

使用试剂盒时，要在有用期内使用，不与其他厂家试剂盒或组分混用，用配套样品稀释液。操作经由中开yun体育网，幸免卵白溶液起泡，加样换枪头，保证温育时辰和洗涤充分，注重底物和断绝液的使用要求，剩余板条密封低温干燥保存。同期，要注重生物安全，注重交叉羞耻，幸免试剂斗争皮肤和吸入烟雾，执行时戴手套，截止后洗手。